排名爆料怎么从粪便中提取dna

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一、怎么从粪便中提取肠道菌

1、收集约200-220mg粪便到一个2ml离心管，置冰上。

如果是冰冻的标本，加入缓冲液ASL前不能解冻，否则DNA容易降解。

2、加1.4ml 缓冲液ASL，连续涡旋振荡1分钟或者直到完全混匀均一。注意完全涡旋混匀，否则会严重降低产量。

3、将重悬物70℃温育5分钟。

该加热步骤可以提高3-5倍DNA产量，并且帮助裂解细菌和寄生虫。对于某些难裂解的细胞（如革兰氏阳性菌）可以提高到95℃。

4、涡旋振荡秒，温放置1分钟。更高速离心1分钟沉淀粪便颗粒。

5、转移900μl上清到一个1.5ml离心管，加入100μl杂质清除剂AB，立刻涡旋振荡1分钟或者直到完全混匀均一，温放置1分钟。更高速离心3分钟去除杂质。

6、转移所有上清到一个1.5ml离心管，更高速离心3分钟。

7、转移210μl上清到一个1.5ml离心管，加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，加入200μl结合液CB，涡旋振荡秒，充分混匀。70℃温育10分钟。

如果产量偏低，可以转移更多的上清，并且相应的按比例提高蛋白酶K和结合液的和后面的异丙醇使用量。

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